坊間對病毒分離的工作，有些誤解。

“分離”一詞讓人感覺病毒能從患者標本中直接“挑揀”出來。但實際上，從病人身體上采集樣本中獲得滿足使用需求的病毒，不僅需要分離出病毒，還要讓它穩(wěn)定傳代。與其說是病毒分離，不如說是“馴服”。

在疫情最初，中國醫(yī)學科學院病原生物學研究所病原體鑒別實驗室團隊與時間賽跑，歷時5天5夜，完成了國家衛(wèi)生健康委交予的病原體平行檢測鑒別任務，并將病毒成功分離出來，獲得穩(wěn)定的病毒培養(yǎng)體系，支持圍繞病毒開展的一系列研究。

3月23日，中國醫(yī)學科學院病原生物學研究所病原體鑒別實驗室副主任任麗麗接受科技日報采訪，講述作為“馴毒者”精打細算、前瞻部署的3個月。

讓病毒在實驗室“活”起來，支撐后續(xù)科研

“病人的樣本來了之后，用1微升就沒1微升，它是不可再生的。但如果把里面的病毒分離出來、穩(wěn)定傳代，那么它就變‘活’了，就是可持續(xù)使用的資源。”任麗麗說，疫情初期，實驗室接到疑似患者的臨床樣本，有灌洗液、痰液、氣道刮取物等，團隊的任務是從中鑒定并“馴服”病毒。

由于樣本的總量有限，需要進行病原學分析等多種操作，每種試驗方案都是以微升計來取用樣本，進行病原學鑒定，分離出病毒是關鍵環(huán)節(jié)，進行后續(xù)病毒致病機制研究等必須要讓病毒能在實驗室中“繁衍生息”。

“樣本到我們手上的時候，已經(jīng)過了幾次的反復凍融，對其中病毒顆粒的完整性影響較大。”任麗麗解釋，反復凍融之后病毒表面的突起蛋白會掉一些，這些突起如果缺失了，那么能進到細胞里的效率就很低了，會影響病毒分離。

反復凍融使得讓新冠病毒的感染增殖并不容易，而它的高致病性又讓操作更多了一份危險。“必須在生物安全3級實驗室操作，考慮只能用微量樣本，我們專門用斜面管減少接種量，同時單管操作避免樣本相互間的交叉污染。”任麗麗說，由于時間緊、樣本有限，綜合考慮生物安全風險，實驗室對相關應急支撐工作儲備了很多解決方案。

“在國家傳染病科技重大專項和中國醫(yī)學科學院醫(yī)學與健康科技創(chuàng)新工程項目支撐下，包括我們團隊在內(nèi)的國內(nèi)優(yōu)秀團隊多年積累，明確冠狀病毒對于哪些細胞系比較敏感，哪些培養(yǎng)體系更容易把病毒分離出來。”任麗麗說，基于經(jīng)驗和技術的積累，團隊很快獲得了“活”的病毒。

多年和呼吸道病毒打交道的經(jīng)驗，讓團隊對病毒復制有基本的判斷經(jīng)驗，樣本接種細胞幾天后，細胞會呈現(xiàn)出病變效應，這表明病毒已經(jīng)在細胞上開始復制，通俗的理解就是“養(yǎng)活了”，但病毒滴度（濃度）是否足夠后續(xù)的研究，還需要持續(xù)培養(yǎng)適應和篩選。團隊也探索多種培養(yǎng)體系，尋找最適宜病毒“生長”的體系。

“雖然很心急，但也要遵循科學規(guī)律，滴度很低的時候有傳代丟失的風險。”任麗麗說。既是戰(zhàn)鼓雷雷，也要心靜如水，這是抗疫科研一線的共性感受。一方面疫情如戰(zhàn)情，戰(zhàn)鼓雷雷催促科研進展，另一方面對病毒的研究按照復制特性、心靜如水尋求突破點。

終于，在夜以繼日的努力之后，任麗麗團隊成功將病毒分離出來，為后續(xù)的研究，如藥物篩選、疫苗評價等工作提供了重要資源。

優(yōu)化病毒檢測方法，追蹤病毒變異

“我們的應急支撐工作沒有結束，在防控形勢的不同時期有不同的問題要解決。”任麗麗說，團隊的科研任務并沒有因為疫情防控形勢的好轉而告一段落。

采集病人的咽拭子進行核酸檢測是目前廣為使用的新冠病毒診斷方法。針對核酸咽拭子檢測可能受取樣、病程等多種因素的影響，可能影響檢測結果而發(fā)生漏診的問題，任麗麗所在的科研團隊用半個月的時間，利用基因工程技術表達、純化出病毒抗原，并研制了血清抗體檢測試劑，其中化學發(fā)光法正在申請國家審批，用于輔助臨床診斷。

“我們正在研發(fā)抗原檢測方法。”任麗麗說，目前還沒有這一原理的檢測方法獲批，它是直接檢測病毒的蛋白，希望能為病毒早期診斷提供便捷的方法。

現(xiàn)階段，疫情在多個國家蔓延，掌握病毒的突變特征是科研工作需要回答的另一個問題。“針對載量往往很低的樣本，必須要找到更高效、更快速的方法，更有效地獲得大量病毒基因組序列，這方面中國有很多科學家們正在努力。”任麗麗說，面對國際上快速蔓延的新冠疫情，希望通過對大量病毒的基因組分析掌握其變化態(tài)勢，為疫情防控提供科學依據(jù)。

推進毒種標準化，新冠病毒成首個新入駐“保藏種”

由于我國在毒種保藏體系建設方面起步較晚，過去做病毒研究工作，毒種往往要從國外引進。目前我國正在開展毒種保藏體系建設，這一工作正在加快步伐。

“在上級部門的支持下，我們目前正在和兄弟單位一起完善毒種的標準化工作。”任麗麗解釋，首先要明確什么樣的毒種能夠進入到保藏行列，而不是保存。其次，要求毒種保藏過程要遵循標準化、規(guī)范化。

“國際學界公認的保藏機構會對毒種進行細致的登記，就像‘戶口本’。上面寫清楚它是誰，基因組特點是什么，滴度如何，用何種培養(yǎng)體系。”任麗麗說，這些方面需要權威團隊的驗證，進而形成行業(yè)共識的指南和規(guī)范。

“新冠病毒是中國研究團隊首先分離出來的，可以將其作為一個模板，完善標準化的過程。”任麗麗說，“毒種在庫里面留好之后，要定期復蘇、擴增，保證它的滴度和活力，將來無論是企業(yè)還是科研，要用的話，能把它用起來，這就是保藏過程。”

從管理規(guī)范化和病毒真正能用起來的角度，毒種標準化的進程正在逐步的推進，任麗麗所在團隊也參與了這些規(guī)范文件的制定推廣工作。從規(guī)范新落地的角度而言，新冠病毒將成為新入駐的“保藏種”。

相較于最早分離出新冠病毒而言，任麗麗認為我國毒種標準化意義更加重大，是“基石性”的工作，是基礎戰(zhàn)略儲備的工作。

（來源：科技日報）

（轉自院校新聞網(wǎng)）